原位末端凋亡检测（Tunel）
实验原理： TUNEL技术可对组织或细胞中凋亡小体或单个凋亡细胞进行染色，能准确反映细胞凋亡典型的生物化学和形态特征。凋亡细胞内内源性核酸内切酶被而将自身染色体DNA切断成缺口或3-OH末端片段这一特点，利用脱氧核苷酸末端转移酶将标有标记物(如,生物素或荧光素)的脱氧核苷酸转移到3-OH末端，再用组化法或荧光检测凋亡细胞。
意义
在研究DNA分子原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，能过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子的特点，应用带有标记的（有性同位素，如3H、35S、32P、荧光素生物素、等非性物质）DNA或RNA片段作为核酸探针，与组织切片或细胞内待测核酸（RNA或DNA）片段进行杂交，然后可用自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的 mRNA或DNA 的存在并定位；用原位杂交技术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有很高的敏感性和特异性，可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。
滴加FITC-TSA：滴加FITC-TSA试剂，避光室温反应5min。后TBST洗3次×10min，PBS洗1次×5min。
DAPI复染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，冲洗后滴加抗荧光淬灭封片1剂封片。
镜检拍照：切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。（紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm,发蓝光；FAM(488)绿光激发波长465-495nm，发射波长515-555 nm，发绿光；CY3红光激发波长510-560，发射波长590nm，发红光。）
以上信息由专业从事tunel检测服务的科锐诺于2024/5/5 8:47:59发布
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