植物组织原位杂交 将待检测的mRNA进行或者生物素标记,将探针和样品蜡片进行杂交,探针会和样品中的mRNA进行互补,通过或者生物素来放大信号,从而检测mRNA的表达区域和表达量。武汉贝科新肽科技有限公司采用ROCHE标记试剂盒和ROCHE检测试剂盒每年完成上百个基因检测。
动物组织原位杂交 将待检测的DNA序列进行或者生物素标记,将探针和样品进行杂交,探针会和样品中的DNA进行互补,通过或者生物素来放大信号,从而检测DNA的表达区域和表达量。
关键组成要素1. 探针探针是与目标核酸互补的核酸片段,是原位杂交的 “检测工具”,其设计直接影响技术的特异性和灵敏度:
类型:根据目标核酸类型可分为 DNA 探针、RNA 探针(cRNA 探针)、寡核苷酸探针等。标记方式:性标记(如 ³²P、³⁵S):灵敏度高,但需防护,已逐渐被非性标记替代;非性标记:如荧光素(FITC、Cy3)、生物素、等,安全性高,易检测。2. 样本需保留核酸的原始位置和结构,常见样本类型:
组织切片(冷冻切片或石蜡包埋切片);细胞涂片、爬片;染色体标本(用于染色体原位杂交)。3. 杂交条件杂交温度、盐浓度、探针浓度等需优化,以确保探针与目标核酸、特异性结合(避免非特异性杂交)。
原位杂交技术自 1969 年由 Pardue 和 Gall 建立以来,不断优化:
从性标记发展为荧光标记(FISH),实现了多重标记和高分辨率成像;结合共聚焦显微镜、超高分辨率显微镜,进一步提升了信号检测的精度;与测序技术结合(如原位测序),可在原位获取高通量核酸序列信息,为空间转录组学等领域提供了强大工具。
原位杂交技术凭借 “空间定位” 的优势,在分子生物学、医学诊断和生命科学研究中占据重要地位,是连接分子水平与形态学水平的关键桥梁。以上信息由专业从事GISH的贝科新肽于2025/9/1 19:08:50发布
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