将32 P标记的双链DNA探针于100℃加热5分钟，迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间，盛滤膜的容器应盖严，以防液体蒸发。
杂交结束后，去除杂交液，立即于室温把滤膜放入大体积（300-500ml）的2×SSC和0.1% SDS溶液中，轻轻振摇5分钟，并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次，同时应避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜两次，每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景很高或实验要求严格的洗膜条件，可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。
怎样保证原位杂交实验操作时的温度?
建议仪器操作，人工操作的话要注意：
（1）对荧光原位杂交操作过程中可能使用的一些仪器进行温控检查，不符合要求的进行更换。
（2）尽可能地保持环境温度在20度以上。
（3）针对需要预热以达到要求温度的试剂，在使用前必须使用温度计对其进行测温。
（4）同时检测的样本不超过4块，操作一定要迅速，实验人员要注意一些小部件的温度，尤其是在冬季。
原位杂交技术还在以下生物领域有应用：
细胞化学和学：原位杂交技术可以用于研究细胞内特定化学物质的定位和分布，例如检测细胞内酶、、神经递质等物质的分布和定位。此外，还可以应用于学研究，例如检测细胞、分子的分布和定位等。
神经科学：在神经科学领域，原位杂交技术常被用于研究神经元的生长、发育和连接等过程。例如，通过标记特定基因的探针，可以检测神经元中特定基因的表达和定位，进而研究其在神经信号传递、神经环路形成等方面的作用。
荧光原位杂交（FISH）技术具有以下优点：
高特异性：荧光探针的合成是定向的，保证了杂交过程的特异性，可以有效地降低非特异性杂交和背景干扰。
高灵敏度：荧光信号的检测比性信号的检测更灵敏，可以检测出低拷贝数的DNA序列，甚至可以检测单个基因序列。
快速简便：FISH技术操作简便，杂交过程可以在数小时或数天内完成，而且不需要过于复杂的设备，便于在实验室开展。
以上信息由专业从事荧光原位杂交的贝科新肽于2025/8/26 13:09:04发布
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