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荧光原位杂交技术（Fluorescence In Situ

Hybridization，FISH）利用核酸分子单链之间互补的碱基序列，通过标记的核酸探针与目标DNA或RNA进行杂交，进而定位和检测特定DNA序列的技术。探针标记可以采用荧光、或者生物素。FISH技术的基本原理是使用已知的标记单链核酸作为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行杂交，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因此可以通过探针直接与染色体进行杂交，从而将特定的基因在染色体上定位。与传统的性标记原位杂交相比，FISH技术具有快速、检测信号强、杂交特异性高和可以多重染色等特点。该方法适用于植物染色体检测、土壤（泥巴）中细菌检测。

关键组成要素1. 探针探针是与目标核酸互补的核酸片段，是原位杂交的 “检测工具”，其设计直接影响技术的特异性和灵敏度：

类型：根据目标核酸类型可分为 DNA 探针、RNA 探针（cRNA 探针）、寡核苷酸探针等。标记方式：性标记（如 ³²P、³⁵S）：灵敏度高，但需防护，已逐渐被非性标记替代；非性标记：如荧光素（FITC、Cy3）、生物素、等，安全性高，易检测。2. 样本需保留核酸的原始位置和结构，常见样本类型：

组织切片（冷冻切片或石蜡包埋切片）；细胞涂片、爬片；染色体标本（用于染色体原位杂交）。3. 杂交条件杂交温度、盐浓度、探针浓度等需优化，以确保探针与目标核酸、特异性结合（避免非特异性杂交）。

探针杂交将标记的探针溶液滴加于样本，在适宜温度（如 37-65℃）下孵育数小时至过夜，使探针与目标 RNA 特异性结合。洗涤用不同浓度的盐溶液洗涤样本，去除未结合的游离探针，降低背景信号。信号检测若为荧光探针：直接用荧光显微镜观察荧光信号；若为生物素 / 探针：通过亲和素 - 生物素复合物或结合标记物，再用酶（如辣根过氧化物酶）催化显色剂（如 DAB）产生可见信号。结果分析观察信号的位置（如细胞内、组织区域）、强度和分布，结合形态学特征解读结果。

以上信息由专业从事原位杂交公司的贝科新肽于2025/9/1 16:17:14发布

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