湖北植物组织原位杂交即时留言「在线咨询」[贝科新肽]内容：实验步骤（以石蜡组织切片 RNA 原位杂交为例）样本制备组织固定：用甲醛等固定剂保存组织形态和核酸（避免 RNA 降解）；包埋与切片：将固定组织石蜡包埋，切成 5-10μm 薄片并贴附于载玻片。预处理脱蜡：用、乙醇去除石蜡，暴露组织；通透处理：用蛋白酶 K 等消化组织蛋白，增加探针对细胞的穿透性；变性（仅 DNA 原位杂交）：高温使 DNA 双链解旋为单链（RNA 原位杂交无需此步骤，因 RNA 为单链）。
探针杂交将标记的探针溶液滴加于样本，在适宜温度（如 37-65℃）下孵育数小时至过夜，使探针与目标 RNA 特异性结合。洗涤用不同浓度的盐溶液洗涤样本，去除未结合的游离探针，降低背景信号。信号检测若为荧光探针：直接用荧光显微镜观察荧光信号；若为生物素 / 探针：通过亲和素 - 生物素复合物或结合标记物，再用酶（如辣根过氧化物酶）催化显色剂（如 DAB）产生可见信号。结果分析观察信号的位置（如细胞内、组织区域）、强度和分布，结合形态学特征解读结果。
生物学研究基因表达定位：研究胚胎发育中关键基因的 mRNA 在组织或细胞中的表达部位（如神经管发育相关基因）；神经科学：分析神经元中特定基因的表达模式，揭示神经环路功能；进化生物学：比较不同物种同源基因的表达差异，探究进化关系。农业与畜牧业检测作物或畜禽的病原体（如植物病毒、动物核酸）；研究作物抗逆基因的表达定位，优化育种策略。
原位杂交技术自 1969 年由 Pardue 和 Gall 建立以来，不断优化：
从性标记发展为荧光标记（FISH），实现了多重标记和高分辨率成像；结合共聚焦显微镜、超高分辨率显微镜，进一步提升了信号检测的精度；与测序技术结合（如原位测序），可在原位获取高通量核酸序列信息，为空间转录组学等领域提供了强大工具。
原位杂交技术凭借 “空间定位” 的优势，在分子生物学、医学诊断和生命科学研究中占据重要地位，是连接分子水平与形态学水平的关键桥梁。
以上信息由专业从事植物组织原位杂交的贝科新肽于2025/8/19 15:11:33发布
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